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1927年7月中旬，中共中央临时政治局常委会派李立三等部分中央领导人至九江组织中共掌握和影响的部队，准备联合张发奎的第二方面军重回广东。7月20日，发现张发奎已追随汪精卫开始“分共”，中共中央遂决定在南昌举行武装起义。7月2７日，周恩来到达南昌，根据中央决定，由周恩来、李立三、恽代英、彭湃组成中央前敌委员会，周恩来任书记，领导起义。
1927年8月1日晨，周恩来、贺龙、叶挺、朱德、刘伯承等指挥党掌握和影响下的北伐军及南昌警察武装共2万多人，举行起义。经四小时激战，全部肃清了敌人，缴获各种枪500余支。同日下午，驻马回岭的第二十五师2个团2000多人，在聂荣臻、周士第率领下起义，第二天赶至南昌集中。中共中央决定仍沿用左派国民党旗帜号召革命。起义部队整编后，亦沿用国民革命军第二方面军的番号，由周恩来、贺龙、叶挺、刘伯承等组成参谋团，作为军事指挥机构，刘伯承兼任参谋长。由贺龙兼任代总指挥，叶挺兼任代前敌总指挥。下辖3个军：第二十军军长贺龙兼，廖乾吾任党代表；第十一军军长叶挺兼，聂荣臻任党代表；第九军副军长朱德，朱克靖任党代表。总计编为16个团又4个营。
南昌起义后，汪精卫急令张发奎、朱培德率部进攻南昌。8月3日，起义军按中共中央的预定计划，取道临川（抚州）、宜黄、广昌南下，准备进军广州，重建革命根据地，获取共产国际的援助，再次北伐。进至进贤时，第十师师长蔡廷锴率部脱离起义军，东去浙江。这时国民党驻广东的第八路军总指挥李济深，急调钱大钧部及黄绍竑部分别经赣州和南雄进入江西，堵击起义军。8月26日，起义军击败钱大钧部进至壬田的3个团后，乘胜占领瑞金。28日至30日，起义军以一部兵力占领洛口，阻击黄绍竑部，而以主力1万人，猛攻会昌钱大钧部。经激战后，歼敌大部，起义军亦伤亡1700余人，陈赓身负重伤。
经过一个多月的行军、战斗，部队已减员近万，战斗力大为削弱。前委决定改道经福建长汀、上杭，进军广东东江，与农民起义军会合。9月18日，攻占大埔、三河坝地区，留朱德、陈毅率第九军教导团及第十一军第二十四师乘船经韩江向潮汕前进。9月23日占领潮汕后，前委决定留第二十军第三师及第十一军第二十四师一部随前委机关驻守潮汕，主力约6500人西进迎击陈济棠部敌军。9月28日，在汤坑（丰顺城）东南白石与敌遭遇，经三昼夜激战，起义军伤亡2000余人，无力再战，退出战斗。在此之前，黄绍竑部集中力量向潮州起义军进攻。由于众寡悬殊，伤病员又多，前委机关遂退至普宁之流沙。由白石退出战斗的部队，于10月3日亦至流沙与前委会合，尔后继续向海陆丰撤退。经过葵潭时，被敌军截为两段，另一部约400多人退至铙平。驻守三河坝的起义军，在击退钱大钧部3个师的多次进攻后，于10月3日突围，撤至铙平与葵潭退来的起义军会合。此后，朱德、陈毅率领这两支部队，在极端困难的情况下，转战至粤北地区，保存了南昌起义军近800人的骨干，为以后开展游击战争起了重要作用。
南昌起义打响了武装反抗国民党反动派的第一枪，标志着中国共产党独立领导革命战争、创建人民军队和武装夺取政权的开始。但是，起义后采取的夺取广东、再行北伐的战略方针，不符合当时中国的实际情况，这是起义军失败的根本原因。
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